В пиесата Макбет лейди Макбет играе решаваща роля в смъртта на крал Дънкан. Тя е тази, която убеждава Макбет да убие краля и му помага да планира и осъществи делото.
След като Макбет изразява съмненията и страховете си относно убийството на краля, лейди Макбет го укорява, че е страхливец, и го засрамва, че е извършил престъплението. Тя посочва, че той вече е имал идеята да убие Дънкан и че той се колебае само поради "слабия си характер". Тя също му напомня за амбицията му да стане крал и му казва, че трябва да бъде безмилостен, ако иска да постигне целите си.
Решителността и манипулацията на лейди Макбет в крайна сметка убеждават Макбет да се съгласи с нейния план. Тя излага подробностите за убийството, включително как и кога трябва да бъде извършено. Тя също така казва на Макбет да остави кървавите ками до тялото на Дънкан, така че вината да падне върху гвардейците на краля.
След като убийството е извършено, лейди Макбет първоначално е уверена, че ще успеят да го прикрият. Скоро обаче тя започва да проявява признаци на вина и лудост. Тя става обсебена от кръвта по ръцете си и не може да заспи. Тя също започва да има видения за призрака на Дънкан, който я обвинява в убийство.
Вината на лейди Макбет в крайна сметка става твърде голяма, за да я понесе. Тя умира в четвъртото действие на пиесата и нейната смърт е повратна точка за Макбет. Той става още по-безмилостен и тираничен и накрая губи ума си.
Ролята на лейди Макбет в смъртта на крал Дънкан е значителна, защото подчертава силата на амбицията и опасностите от това да позволим на нечии желания да надделеят върху моралните принципи. Тя е сложен и трагичен герой, който в крайна сметка е унищожен от собствената си амбиция и вина.