Техниката на Kirby-Bauer е стандартен микробиологичен метод, използван за определяне на чувствителността на бактериите към антимикробни агенти. То включва измерване на зоната на инхибиране на бактериалния растеж около импрегнирани с антибиотик дискове, поставени върху агарово блюдо, инокулирано с тестовия организъм. Ето основните стъпки на техниката Kirby-Bauer:
1. Приготвяне на инокулума :
- Получава се чиста култура от тестовия бактериален щам и се отглежда в подходяща бульонна хранителна среда, за да се постигне логаритмична фаза на растеж (мътност).
- Бактериалната суспензия е стандартизирана до специфична мътност, обикновено еквивалентна на 0,5 стандарт за мътност на McFarland, за да се осигури постоянна плътност на инокулума.
2. Инокулация на агар плоча :
- За теста се използват стерилни агарови плаки, съдържащи агар на Мюлер-Хинтън или друга подходяща агарна среда.
- С помощта на стерилен памучен тампон, стандартизираният инокулум се разпределя равномерно върху повърхността на агаровата плака, за да се създаде сливаща се поляна от бактериален растеж.
- Инокулираната плоча се оставя да изсъхне за няколко минути, за да абсорбира излишната влага.
3. Приложение на антибиотични дискове :
- Стерилни антибиотични дискове, съдържащи специфични концентрации на антимикробни агенти, се поставят върху повърхността на плочата с агар на равни интервали, като се използват стерилни щипци или диспенсър за дискове.
- Дисковете се притискат внимателно, за да се осигури добър контакт с повърхността на агара, без да се повреждат дисковете.
4. Инкубацията :
- Инокулираната плака с антибиотични дискове се инкубира при подходяща температура (обикновено 35-37°C) за определен период (обикновено 16-24 часа), за да се даде възможност за бактериален растеж и дифузия на антимикробни агенти.
5. Измерване на зони на инхибиране :
- След инкубация плочите се изследват за наличие на зони на инхибиране около антибиотичните дискове.
- С помощта на линийка или цифров дебеломер се измерва диаметърът на всяка зона на инхибиране в милиметри.
- Диаметърът на зоната показва чувствителността на тестовия организъм към конкретния антибиотик.
6. Тълкуване на резултатите :
- Измерените диаметри на зоните се сравняват със стандартизирани таблици или насоки, като тези, предоставени от Института за клинични и лабораторни стандарти (CLSI), за да се определи чувствителността или резистентността на тестовия организъм към тестваните антимикробни агенти.
- Организмите се категоризират като чувствителни, междинни или резистентни въз основа на размера на зоните на инхибиране и установените критерии за тълкуване.
7. Контрол на качеството :
- За да се гарантира точността и надеждността на техниката Kirby-Bauer, във всяка партида от тестове се включват щамове за контрол на качеството с известни модели на чувствителност, за да се наблюдава ефективността на метода и използваните реагенти.
Важно е да се следват стандартизирани процедури и да се интерпретират резултатите съгласно установените насоки, за да се получи надеждна и клинично значима информация от теста за чувствителност към антибиотици на Kirby-Bauer.